Jdi na obsah Jdi na menu
 


Izolace a kultivace bakterií rodu Clostridium

1. 8. 2018

Clostridium je rod gram-pozitivních, pohyblivých, obligádně anaerobních tyčinek tvaru tvořící endospory. Endospory jsou v tomto případě umístěny terminálně a bubří tyčinku. Některé Clostridie (Clostridium perfringens, C. difficile) jsou původci kolitid, které jsou spojené se silnými průjmovými onemocněními u savců včetně člověka. Tato onemocnění patří především mezi nozokomiální nemoci způsobené dlouhodobým užívaním antibiotik. Další bakterie rodu Clostridium způsobují tzv. anaerobní traumatózy a řadíme je mezi histotoxická Clostridia (C. novyi, C. chauvoei, C. septicum, C. perfringens). Třetí skupinou jsou Clostridia, která způsobují generalizovaná neurologická onemocnění v důsledku produkce toxinu (Clostridium tetani - tetanus, C. botulinum - botulismus).

Bakterie rodu Clostridium běžně žijí v půdách s kyselou reakcí. Vhledem k jejich vztahu ke kyslíku se v půdách vvyskytují především ve formě spor. Pro kultivaci je nezbytné najít takové stanoviště a odebrat více vzorků půdy. Následně se připraví směsný vzorek smícháním všech dílčích vzorků s destilovanou vodou v poměru 1:10 a velice pečlivě se protřepe. V zemině se mimo Clostridií nachází velká spousta jiných bakterí. Aby byla kultivace úspěšná, je nezbytné v první fázi dvakrát přefiltrovat suspenzi zeminy přes buničitou vatu a následně filtrát přerozdělit rovnoměrně do několika zkumavek. Paserizací ve vodní lázni o teplotě 75 - 80°C po dobu 10 - 20 minut dojde ke zničení všech vegetativních buněk, spory však přežií. V dalším kroku přepipetujeme sterilní pipetou 1 ml pasterizovaného extraktu do sterilního, ještě horkého kapalného živného média (9 ml). Médium je třeba použít ihned po sterilizaci, aby byla zajištěna jeho dobrá redukce. Ve starších médiích je již rozpuštěno značné množství kyslíku, a jsou tedy pro kultivaci obligádních anaerobů nepoužitelná. Aby bylo kyslíku zamezeno difundovat do média během kultivace, převrství se naočkované médium sterilním parafinovým olejem ve výšce 1 cm. Kultivace probíhá ve 30°C po dobu 3 dnů.