Ze světa nejmenších rozměrů

Gramovo barvení je diagnostické selektivní barvení. Tato metoda rozděluje bakterie na dva velké tábory - gramnegativní (G-) a grampozitivní (G+), a to podle stavby jejich buněčné stěny. Gramovo barvení se skládá ze čtyř kroků: barvení krystalovou violetí, barvení Lugolovým roztokem, odbarvení aceton-ethanolovou směsí, dobarvování karbolfuchsinem nebo safraninem.

Gramnegativní bakterie

Gramnegativní bakterie mají buněčnou stěnu tvořenou převážně lipopolysacharidy, která je navíc překrytá druhou, vnější membránou. Následkem toho se v buněčné stěně neudrží komplex tvořený krystalovou violetí a IIK (jodjodkalium, Lugolův roztok) a vymyje se. Bakterie jsou výsledně obarveny karbolfuchsinem nebo safraninem a jsou tedy červené.

Grampozitivní bakterie

Grampozitivní bakterie nemají druhou, vnější membránu a jejich buěčná stěna je převážně tvořena peptidoglykany. Komplex krystalvioleť + IIK se v těchto strukturách lépe udrží a nevymývá se. Po dobarvení karbolfuchsinem nebo safraninem je výsledná barva těchto bakterií fialová nebo tmavě modrá. 

Postup vlastního barvení

Na fixovaný vychladlý preparát naneseme vrstvu krystalové violeťi a necháme působit 20 vteřin. Po uplynutí času převrstvíme krystalvioleť na několik vteřin Lugolovým roztokem a barviva slijeme. Preparát převrstvíme opět Lugolovým roztokem a necháme působit 20 - 30 vteřin. Roztok slijeme a odbarvujeme aceton-ethanolovou směsí, případně pouze ethanolem. Odbarvovací činidlo musí přes preparát pouze stékat, nesmí se kapat přímo na preparát. Odbarvujeme, dokud ještě odtéká obarvený roztok odbarovacího činidla. Poté ihned opláchneme vodou. Konečně se preparát převrství roztokem karbolfuchsinu nebo safraninu po dobu 60 vteřin. Poslední procedurou je oplach vodou a usušení.

Poznámky

Příliš dlouhé odbarvení vede k vyplavení barviva i z G+ bakterií, které se následně budou jevit falešně negativně.

Aceton-ethanololová směs: 4 díly ethanolu + 1 díl acetonu.

Bakterie zubního hlenu - směs bakterií

Plná velikost fotografie ve fotoalbu.