Jdi na obsah Jdi na menu
 


Průkaz hydroláz

15. 6. 2019

Hydrolázy jsou enzymy, které štěpí molekuly za součinnosti vody. Do skupiny hydroláz patří velká spousta enzymů, některé význnamné jsou zde uvedené.

Glykosidázy

Glykosidázy jsou enzymy, které obecně štěpi glykosidové vazby. V souvislosti s mikrobiologií se mluví zejména o enzymech, které štěpí O-glykosidové vazby, tedy štěpí oligo- a polysacharidy. Testování na produkci glukosidáz se provádí v tekutém univerzálním médiu obohaceném o 0,5 - 1 % testovaného sacharidu. Jako indikátor se používá bromkresolový purpur nebo bromthymolová modř.

Proteázy

Proteázy (peptidázy) jsou hydrolázy, které štěpí proteiny. Produkci těchto enzymů sledujeme na vpichové kultuře v živných médiích ztužených želatinou. Želatina je složena z proteinů, které se působením peptidáz štěpí. Důsledkem toho ztrácí želatina svou rigiditu a ztekucuje se. Pro objektivní posouzení výsledků by se měl test provádět současně s negativní kontrolou (jedna zkumavka s želatinou se nechá nenaočkovaná - nesmí dojít ke ztekucení).

Ureáza

Ureáza je hydroláza štěpící ureu (močovinu) na amoniak a oxid uhličitý. Ureáza hraje například významnou roli u bakterií rodu Helicobacter, které přežívají ve sliznici žaludku díky alkalizaci jinak kyselého prostředí amoniakem. Ureázu lze testovat v médiích obohacených o ureu, indikátorem alkalizace je fenolová červeň. Prakticky se ureáza samostatně netestuje, význam má v komerčních biochemických diagnostických setech.

Biochemické sety

Zde uvedené tři hydrolázy jsou základní sestava, o které by měl něco vědět každý, kdo se jen trochu motá kolem mikrobiologie. Hydroláz je, jak již bylo uvedeno, daleko větší množství, prakticky se však produkce těchto enzymů samostatně netestuje. Význam specifických reakcí na průkaz enzymů nalezneme u biochemických setů pro diagnostiku bakterií. Jedná se o mikrotitrační destičku předplněnou směsí chemikálií. Jamky se naplní předepsaným objemem suspenze testované bakterie, případně se do předepsaných jamek ještě přidají určitá aditiva a nechá se inkubovat v podmínkách dle návodu výrobce. Podle změny barvy v jednotlivých jamkách lze porovnáním v seznamu získat konkrétní druh bakterie.